Os processos químicos envolvidos na extração de DNA.

Abstract

As fitopatologias representam um dos principais fatores que anualmente comprometem a produtividade das lavouras, uma vez que podem afetar negativamente o desenvolvimento da planta ou até mesmo levar à morte da mesma, gerando impactos financeiros para produtores e colocando em risco a segurança alimentar. Apesar dos avanços tecnológicos, a produção de alimentos no mundo ainda é um desafio a ser superado. Segundo dados da FAO-ONU, em 2017 havia cerca de 815 milhões (11% da população) vítimas de fome no mundo. Por esse motivo o entendimento claro de uma fitopatologia é um fator de extrema importância para assegurar a produtividade da lavoura. O emprego dos conhecimentos de biologia molecular vem contribuindo significativamente para expansão do conhecimento na área agrícola. A partir da técnica de extração de DNA vegetal é possível o isolamento do material genético do agente etiológico, dando base para entendimento mais aprofundado dos sintomas, diagnose, epidemiologia e definição das formas de controle mais eficazes para a fitopatologia. Nesse sentido, este trabalho irá detalhar as etapas necessárias para isolamento do DNA da bactéria Gram Negativa Xylella fastidiosa, agente etiológico causador da Clorose Variegada dos Citros (CVC) também popularmente conhecida como “amarelinho”, a partir da extração do DNA vegetal e todos os processos físico-químicos envolvidos, e realizar o PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). Todo esse processo será realizado a partir do método adaptado de Murray & Thompson com substituição do reagente de extração/purificação Cloreto de Césio pelo Clorofórmio Álcool Isoamílico (CIA), com o objetivo de realizar o controle positivo da doença nos pomares da região de Araras, interior de São Paulo, a partir da utilização de um reagente que não seja radioativo e que represente menos riscos para a saúde de quem o manipular e menores impactos ambientais.

Palavras-chave: DNA; extração; fitopatologia; PCR.