Padronização de protocolos para extração de DNA em espécies do gênero Jatropha

Abstract

Para estudos moleculares com espécies de Jatropha, métodos práticos de extração de DNA devem ser estabelecidos, a fim de se obter um material genético de melhor qualidade e quantidade. Neste trabalho foi comparada a eficiência de quatro metodologias baseadas no componente CTAB, para extração de DNA, todas com modificações. Foram utilizados nove acessos de Jatropha curcas, cinco de Jatropha pohliana e um de Jatropha gossypifolia, para se verificar a concentração e pureza do DNA, e posteriormente, se estes genótipos seriam passíveis de amplificação por PCR. As metodologias comparadas foram: Doyle e Doyle (1990), DArT, Zhang e Stewart (2000) e Elias et al. (2004), esta última, testando três temperaturas de desidratação das folhas em estufa a 30ºC, 35ºC e 60ºC. Os testes indicaram que as quatro metodologias apresentaram resultados satisfatórios para as reações de amplificação, diferindo apenas pela concentração e pureza das amostras. A metodologia proposta em DArT foi a mais eficiente para J. curcas. J. pohliana e J. gossypifolia apresentaram melhores resultados quando se utilizou a metodologia de Elias et al. (2004), nas temperaturas de desidratação das folhas a 30 e 35ºC, respectivamente. O protocolo de Elias et al. (2004) utilizando a temperatura de 60ºC, forneceu resultados inferiores aos demais.

For molecular studies with Jatropha species, practical methods of DNA extraction must be established, to obtain a better quality and quantity genetic material. In this work, were compared the efficiency of four methodologies of DNA extraction based on the component CTAB, all with modifications. Were used nine accessions of Jatropha curcas, five of Jatropha pohliana and one of Jatropha gossypifolia, to verify the concentration and purity of DNA, and after this, if these genotypes would be able for amplification by PCR. The compared methodologies were: Doyle e Doyle (1990), DArT, Zhang and Stewart (2000) and Elias et al. (2004), this last one, testing three temperatures of leaves dehydration in the oven at 30°C, 35°C and 60°C. The tests showed that the four methodologies presented satisfactory results for the amplification reactions, differing only for concentration and purity of samples. The methodology of DArT was the most efficient to J. curcas. J. pohliana and J. gossypifolia presented better results when was used the methodology of Elias et al. (2004), in the dehydration temperatures of leaves at 30° and 35°C , respectively. The Elias et al. (2004) protocol, using the temperature at 60°C, provide lower results than the other ones.